Study of the biological activity of compositions based on a recombinant interleukin-1 receptor antagonist upon injection and inhalation administration in a model of pulmonary inflammation in mice

Full Text

Обоснование

Острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС), тяжелая форма дыхательной недостаточности, является основной причиной госпитализации в отделение интенсивной терапии и имеет высокий уровень смертности [1].  ОРДС может быть вызван как прямым поражением легких, например, вследствие бактериальных или вирусных инфекций, так и косвенными повреждениями, такими как сепсис [2-3].

Несмотря на гетерогенность ОРДС, острая экссудативная фаза обычно характеризуется обширным альвеолярным и эндотелиальным повреждением, что приводит к отеку легких и усилению воспалительной реакции. Последнее проявляется повышением легочных и системных уровней провоспалительных цитокинов (например, интерлейкина (ИЛ)-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, фактора некроза опухоли α (ФНОα)) и нейтрофильной инфильтрацией в легкие, что усиливает альвеолярное повреждение и отек легких [4]. Быстрое разрешение этой обратимой острой фазы имеет решающее значение для разрешения ОРДС до развития и установления легочного фиброза, в конечном итоге приводящего к дыхательной или полиорганной недостаточности [5].

Исходя из описанного патогенеза ОРДС, блокирование ключевого провоспалительного цитокина ИЛ-1 может прервать развитие всего каскада острой воспалительной реакции. Одним из наиболее эффективных блокаторов биологического действия ИЛ-1 является рецепторный антагонист ИЛ-1 (ИЛ-1ра), представляющий собой эндогенную молекулу, синтезируемую клетками организма для контроля развития воспаления. ИЛ-1ра ингибирует действие ИЛ-1 путем конкурентного связывания мембранного рецептора первого типа к интерлейкину-1 и предотвращения взаимодействия рецептора с его акцессорным белком, что исключает проведение сигнала внутрь клетки [6].

Те же сигналы опасности, которые образуются при повреждении эпителия стимулируют продукцию активных форм кислорода (АФК), включая супероксид-анион    (O₂^•-), гидроксильный радикал (ОH^•) и пероксид водорода (H₂O₂), которые в норме призваны для борьбы с любыми инфекционными агентами. Поврежденные клетки хозяина сдвигают редокс-гомеостаз в сторону накопления АФК, что приводит к окислительному стрессу, хронической активации иммунных реакций, воспалению и вносит свой негативный вклад в патогенез ОРДС [7-9].

Супероксиддисмутаза катализирует реакцию дисмутации супероксидных радикалов и предотвращает образование других, более опасных для организма радикалов: гидроксильного радикала и синглетного кислорода. Кроме того, супероксиддисмутаза предотвращает накопление в очаге воспаления нейтрофилов, которые секретируют значительные количества лизосомальных ферментов, разрушающих близлежащие ткани; нормализует протекающие с участием свободных радикалов кислорода окислительные процессы и предупреждает окислительную модификацию белков, а также связанное с активацией перекисного окисления липидов разрушение биомембран клеток.

Фармакологическое лечение с использованием экзогенного СОД еще не является установившейся клинической практикой, и обычно препарат применяется в виде пищевых добавок, хотя в ряде публикаций описаны позитивные эффекты применения человеческой Сu, Zn-СОД при лечении хронических и острых заболеваний легких у детей и купировании РДС у новорожденных. При этом был использован интраназальный способ введения СОД [10-11].

Совместное применение ИЛ-1ра и СОД при ОРДС ранее не изучалось, хотя представляется целесообразным, поскольку рецепторный антагонист интерлейкина-1 и блокатор АФК, каким является СОД, действуют каждый на свою мишень, и предполагается, что комплексный препарат ИЛ-1ра и СОД должен обеспечивать аддитивный эффект при лечении ОРДС. Кроме того, действие ИЛ-1ра ранее не было исследовано при ингаляционном применении, хотя при лечении легочных патологий его прямая доставка в очаг воспаления кажется более предпочтительной.

В рамках настоящей работы биологическую активность разработанных композиций на основе рекомбинантного рецепторного антагониста интерлейкина-1 человека исследовали на модели острого респираторного дистресс-синдрома, индуцированного блеомицином.

Поражения легких при ОРДС включают нарушения гемодинамики (такие как альвеолярный отек и кровоизлияние), повреждение сосудов и бронхов, интерстициальные воспалительные скопления клеток и, в конечном итоге, фиброз. Блеомицин вызывает прямое повреждение клеток легких у мышей и крыс, разрушая цепочки ДНК, создавая свободные радикалы и индуцируя окислительный стресс. При повреждении пораженные клетки выделяют мочевую кислоту и многие другие факторы, которые инициируют агрегацию альвеолярных макрофагов и высвобождение провоспалительных цитокинов («цитокиновый шторм»). 

В течение первой недели после введения блеомицина сообщалось о заметном повышении уровня провоспалительных цитокинов (ФНОα, ИЛ-1, ИЛ-6). Усиление регуляции профибротических маркеров (трансформирующий фактор роста (TGF) β1, фибронектин и коллаген) наблюдалось на 14-й день. На второй-третьей неделе в легочной ткани проявляются неоднородные фиброзные участки с отложением внеклеточного матрикса (ECM), в основном в форме фибронектина и коллагена I. Фиброз, индуцированный блеомицином, может быть связан с цитокинами, секретируемыми альвеолярными макрофагами после повреждения легких, такими как TGF, ИЛ-1, фактор роста тромбоцитов и воспалительный белок макрофагов-1. Фиброз развивается на 30й день после первого введения блеомицина и подтверждается гистологическими методами [12].

Цель

Целью настоящей работы являлось изучение эффективности действия ИЛ-1ра при парентеральном и ингаляционном применении как в виде индивидуального средства, так и в сочетании с СОД, на модели ОРДС, индуцированного блеомицином.  

Материалы и Методы

В исследовании использовали мышей-самцов BALB/c массой 16,4-24,3 г (филиал НИЦ «Курчатовский институт» - ПИЯФ - ПЛЖ «Рапполово»). Рандомизация на группы проводилась по массе тела. Всем животным проводили фоновую оценку функции внешнего дыхания (спирометрию).

При моделировании ОРДС животным контрольных и опытных групп вводили блеомицин внутрибрюшинно (в/бр) в дозе 2 мг/мышь на 1-й, 8-й и 15-й дни эксперимента. 

Исследуемые препараты: 10,0 мг/мл раствор рекомбинантного рецепторного антагониста интерлейкина-1 (ИЛ-1ра) и 10,0 мг/мл раствор ИЛ-1ра, содержащий 0,4 мг/мл супероксиддсимутазы (ИЛ-1ра+СОД) - вводили животным опытных групп подкожно (п/к) в дозе (по ИЛ-1ра) 2 мг/мышь (0,2 мл/мышь) или ингаляционно (инг) в дозе (по ИЛ-1ра) 2 мг/мышь (около 0,3 мл/мышь) ежедневно в течение 15 дней, начиная с первого дня эксперимента. Животным контрольной группы в таком же объеме вводили физиологический раствор подкожно или ингаляционно ежедневно в течение 15 дней.

Используемые дозы были определены на основе предыдущих исследований in vivo и литературных данных, показывающих эффективную антагонистическую активность ИЛ-1ра (связывание с рецептором и ингибирование нисходящего сигнального пути) [13].

Взвешивание животных проводили через день. Ежедневно отмечали гибель животных. Через 24 часа после последней инъекции блеомицина, а также на 7-е и 15-е сутки после окончания введения блеомицина всем выжившим животным проводили спирометрию. По 3-5 животных из каждой группы подвергались эвтаназии методом цервикальной дислокации, после чего производили забор материала для гистологических исследований.

Статистический анализ проводили с помощью программы Microsoft Excel (Microsoft Corporation). Результаты представляли в виде средних значений и ошибок среднего (М±m). Сравнение показателей между группами проводили с помощью непарного Т-критерия Стьюдента с неравными отклонениями, а также по U-критерию Манна-Уитни. Отличия считали достоверными при р<0,05.

Результаты

Результаты оценки влияния исследуемых препаратов на динамику массы тела животных на фоне внутрибрюшинного введения блеомицина представлены в табл. 1.

В ходе эксперимента были обнаружены статистически значимые различия экспериментальных групп от группы интактных животных (р≤0,05). Введение блеомицина приводило к ожидаемой потери массы тела животных, начиная с 3-го дня и достигая максимальных значений 20-23%. Потеря массы животными после инъекций блеомицина отмечалась и в других исследованиях [14]. Однако между группами животных, получавших лечение и физиологический раствор, существенных различий не выявлено.

Результаты оценки влияния курсового подкожного и ингаляционного введения препаратов на основе ИЛ-1ра на выживаемость животных после трехкратного внутрибрюшинного введения блеомицина представлены на рис. 1. Использованная модель ОРДС, вызванного блеомицином, оказалась достаточно летальной для животных контрольной группы, получавших физиологический раствор: наблюдалась существенная гибель животных (до 7 голов из 15 на 11-й день эксперимента). Такие же результаты наблюдали в опытной группе, получавшей ингаляционно ИЛ-1ра. Тогда как в экспериментальных группах животных, получавших подкожно композиции ИЛ-1ра и ИЛ-1ра+СОД и ингаляционно композицию ИЛ-1ра+СОД, количество погибших животных доходило максимум до 2-3 из 15. Приведенные результаты позволяют заключить, что подкожное введение ИЛ-1ра и ИЛ-1ра+СОД и ингаляционное введение ИЛ-1ра+СОД положительно влияет на выживаемость животных после трехкратного внутрибрюшинного введения блеомицина.

Результаты оценки влияния курсового введения композиций на основе ИЛ-1ра на показатели функции внешнего дыхания животных представлены в табл. 2.

Представленные данные показывают, что основными параметрами функции внешнего дыхания, существенно уменьшающимися при интоксикации блеомицином, являются амплитуда изменения давления воздушного потока и скорость его нарастания при выдохе. Амплитуда снижалась на 21 – 33 %, скорость выдоха – на 21 – 26 % (р≤0,05) по сравнению с результатами интактных животных. Графически данные представлены на рис. 2-3.

При подкожном введении ИЛ-1ра амплитуда снизилась на 11 % (р=0,1138), скорость выдоха – на 4 % (р=0,2642) по сравнению с интактными животными, однако эти изменения не были статистически значимыми. В то же время, по сравнению с результатами животных, получавших подкожно физиологический раствор, эти показатели были выше: амплитуда – на 32 % (р=0,0934), скорость выдоха – на 29 % (р=0,0312).

Подобные изменения были обнаружены также при подкожном введении ИЛ-1ра+СОД. По сравнению с интактными животными амплитуда снизилась на 14 % (р=0,0559), скорость выдоха – на 13 % (р=0,0426), а по сравнению с животными, получавшими подкожно физиологический раствор, амплитуда была выше на 28 % (р=0,0394), скорость выдоха – на 17 % (р=0,0077).

Таким образом, курсовое подкожное введение ИЛ-1ра и ИЛ-1ра+СОД приводило к статистически значимому улучшению показателей, характеризующих внешнее дыхание мышей при интоксикации блеомицином.

Между группами животных, получавшими ингаляционно ИЛ-1ра или ИЛ-1ра+СОД и физиологический раствор, статистически значимых различий оцениваемых показателей функции внешнего дыхания не выявлено.

Для патоморфологического исследования эвтаназию животных всех экспериментальных групп и группы интактного контроля осуществляли через 7 суток после последнего внутрибрюшинного введения блеомицина.

Патоморфологический анализ легких животных из группы интактного контроля выявил у 2 из 5 самцов деструктивные изменения в бронхах и паренхиме легких (рис. 4А, 4Б). Изменения характеризовались многочисленными инфильтратами в паренхиме легких, периваскулярными и перибронхиальными инфильтратами, преимущественно лейкоцитарного характера. Эти изменения у интактных животных расценивались как спонтанная патология.

У всех мышей из группы позитивного контроля, получавшей физиологический раствор, наблюдалось выраженное полнокровие сосудов легких, плазматизация и геморрагическое пропитывание межальвеолярных перегородок, у 2 из 3 подопытных мышей отмечались различной степени выраженности и зрелости (наличие сидерофагов) участки кровоизлияний (рис. 5А, 5Б).

Только у 1 из 3 животных опытной группы, получавшей подкожно ИЛ-1ра, к 7-м суткам отмечалось кровоизлияние (рис. 6А), у двух других самцов не наблюдались подобные деструктивные изменения в паренхиме легких (рис. 6Б), выявлена лишь слабо выраженная спонтанная патология (перибронхиальные инфильтраты).

У всех самцов опытной группы, получавшей подкожно ИЛ-1ра+СОД, выявлена спонтанная патология различной степени выраженности и на ее фоне у 2 из 4 подопытных мышей отмечали немногочисленные участки с диапедезом эритроцитов, плазматизацией и геморрагическим пропитыванием межальвеолярных перегородок (рис. 7).

Таким образом, через 7 суток после трехкратного внутрибрюшинного введения блеомицина отмечается выраженное полнокровие сосудов легких, кровоизлияния в паренхиму легких с плазматизацией и геморрагическим пропитыванием межальвеолярных перегородок.  

В каждой опытной или контрольной группах в той или иной степени выраженности была выявлена спонтанная патология, характеризующаяся многочисленными инфильтратами паренхимы легких, периваскулярными и перибронхиальными инфильтратами, преимущественно лейкоцитарного характера.

Сравнивая выявленные изменения в легких у подопытных мышей между всеми изучаемыми группами, можно отметить наиболее выраженные деструктивные изменения у животных группы позитивного контроля и опытной группы, получавшей подкожно ИЛ-1ра+СОД, снижение деструктивных изменений наблюдалось у подопытных животных в группах, получавших подкожно или ингаляционно ИЛ-1ра и ингаляционно ИЛ-1ра+СОД.

Обсуждение

В результате проведенных исследований биологической активности композиций на основе рецепторного антагониста интерлейкина-1 при инъекционном и аэрозольном введении на модели легочного воспаления у мышей, индуцированного блеомицином, было показано, что лечение препаратами ИЛ-1ра и ИЛ-1ра+СОД (при обоих способах введения) не оказывало влияния на динамику массы тела мышей на фоне внутрибрюшинного введения блеомицина.

При оценке влияния курсового подкожного и ингаляционного введения препаратов на основе ИЛ-1ра на выживаемость животных после трехкратного внутрибрюшинного введения блеомицина следует отметить, что подкожное и ингаляционное введение ИЛ-1ра+СОД, а также подкожное введение ИЛ-1ра положительно влияли на выживаемость животных. Не было выявлено преимущества при использовании комплексного препарата ИЛ-1ра+СОД, также как и выгодного эффекта от ингаляционной доставки ИЛ-1ра в сравнении с подкожным введением, что может быть связано с наличием спонтанной патологии во всех группах мышей, использованных в эксперименте.

Изучение влияния препаратов на основе ИЛ-1ра на показатели функции внешнего дыхания (в том числе, амплитуда изменения давления воздушного потока, скорость увеличения давления воздушного потока при выдохе) при курсовом введении на фоне трехкратного внутрибрюшинного введения блеомицина показало, что подкожное введение ИЛ-1ра и ИЛ-1ра+СОД приводит к статистически значимому улучшению показателей, характеризующих внешнее дыхание мышей при интоксикации блеомицином. В то же время, при ингаляционном введении ИЛ-1ра и ИЛ-1ра+СОД статистически значимых различий оцениваемых показателей с группой животных, получавших ингаляции физиологического раствора, не обнаружено. Однако в группе животных, получавших ингаляционно ИЛ-1ра, наблюдались позитивные изменения по показателям: амплитуда изменения давления воздушного потока и скорости его нарастания при выдохе и выдохе - достигающие и превышающие значения этих показателей у интактных животных. Это, несмотря на отсутствие статистически значимых отличий по сравнению с контрольными группами, которое может быть связано с малым количеством мышей в данной опытной группе, может свидетельствовать о положительном воздействии ИЛ-1ра при ингаляционном пути введения на функцию внешнего дыхания подопытных животных. 

Снижение деструктивных изменений в легких, вызванных внутрибрюшинным введением блеомицина и характеризующихся выраженным полнокровием сосудов легких, кровоизлияниями в паренхиму легких с плазматизацией и геморрагическим пропитыванием межальвеолярных перегородок, наблюдалось у подопытных животных в группах, получавших ингаляционно ИЛ-1ра или ИЛ-1ра+СОД и подкожно ИЛ-1ра.

Заключение

Суммируя результаты проведенных исследований, можно констатировать достижение положительного действия обоих исследуемых препаратов ИЛ-1ра и ИЛ-1ра+СОД, которые были использованы в режимах инъекционного и ингаляционного введения, при лечении ОРДС, вызванного действием блеомицина на модели у мышей. В то же время, расчет на ожидаемое синергичное действие комплексного препарата ИЛ-1ра+СОД в рамках этой модели не получил должного достоверного подтверждения. Результаты исследования также не позволяют отдать преимущество инъекционному или ингаляционному путям введения при очевидности достижения реальных положительных эффектов.

Вместе с тем, опыт применения рекомбинантного ИЛ-1ра (МНН - анакинра) в виде единственного зарегистрированного лекарственного средства «Кинерет» демонстрирует необходимость его ежедневного внутривенного или подкожного введения из-за короткого времени полувыведения и чрезвычайной длительности инъекционного курса (28 инъекций) для достижения требуемой эффективности [15]. Полученные в данном исследовании результаты, показавшие равную эффективность препаратов ИЛ-1ра и ИЛ-1ра+СОД при лечении ОРДС, со всей очевидностью свидетельствуют в пользу, во-первых, неинвазивного ингаляционного способа введения и, во-вторых, достаточности использования индивидуального препарата ИЛ-1ра с целью минимизации влияния вводимых в организм человека количеств биологически активных субстанций.

Дополнительная информация

Источник финансирования. Научное исследование проведено при поддержке Федерального медико-биологического агентства (государственный контракт № 25.451.23.0).

Funding source. This work was supported by the Federal Medical and Biological Agency (government contract № 25.451.23.0).

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Competing interests. The authors declare that they have no competing interests.

Вклад авторов. А.М. Ищенко — идея работы, сбор и анализ литературных источников, написание текста и редактирование статьи; К.А. Некрасова — планирование эксперимента, интерпретация данных, подготовка и написание текста статьи; Д.С. Лаптев — проведение эксперимента, сбор данных в эксперименте, обработка данных; Д.В. Бобков — проведение эксперимента, сбор данных в эксперименте, обработка данных; А.А. Колобов — обсуждение, написание и редактирование статьи; А.С. Симбирцев — общее руководство, обоснование эксперимента, интерпретация данных. Все авторы подтверждают соответствие своего авторства международным критериям ICMJE (все авторы внесли существенный вклад в разработку концепции, проведение исследования и подготовку статьи, прочли и одобрили финальную версию перед публикацией).

Author contribution. A.M. Ishchenko — idea of ​​the work, collection and analysis of literary sources, writing the text and editing the article; K.A. Nekrasova — planning the experiment, interpreting the data, preparing and writing the text of the article; D.S. Laptev — conducting the experiment, collecting data in the experiment, processing the data; D.V. Bobkov — conducting the experiment, collecting data in the experiment, processing the data; A.A. Kolobov — discussion, writing and editing the article; A.S. Simbirtsev — general management, justification of the experiment, interpretation of the data. All authors confirm that their authorship meets the international ICMJE criteria (all authors have made a significant contribution to the development of the concept, research and preparation of the article, read and approved the final version before publication).

Таблицы

Таблица 1. Влияние препаратов на основе ИЛ-1ра на динамику массы тела животных на фоне внутрибрюшинного введения блеомицина

Table 1. Effect of IL-1ra-based drugs on the dynamics of animal body weight with intraperitoneal administration of bleomycin

Группы	Масса тела животных, г (М±SD)
	Фон	3 день	5 день	7 день	9 день	11 день	13 день	15 день	21 день
Контроль (интактный)	20,86±2,42 n=15	21,95±1,98 n=15	23,53±2,11 n=15	24,95±1,86 n=15	25,93±1,85 n=15	26,00±1,95 n=15	27,15±1,81 n=15	27,38±1,82 n=15	28,92±2,47 n=10
Контроль (физ. раствор, п/к)	20,82±2,04 n=15	18,82±2,08 n=15	16,78±2,85* n=12	18,09±3,93* n=9	18,13±3,72* n=9	17,23±2,02* n=8	16,70±1,58* n=8	17,07±1,72* n=8	17,05±3,75* n=2
ИЛ-1ра, п/к	20,80±1,38 n=15	19,26±1,61 n=15	16,86±1,80* n=14	17,52±2,33* n=12	18,26±2,21* n=12	17,03±1,60* n=12	16,89±1,17* n=12	17,98±1,67* n=12	16,38±1,74* n=6
ИЛ-1ра +СОД, п/к	20,84±1,83 n=15	19,19±1,95 n=15	17,10±1,94* n=13	18,28±1,61* n=13	18,79±1,75* n=13	16,81±1,44* n=13	16,86±1,34* n=13	17,39±1,84* n=13	17,01±2,72* n=7
Контроль (физ. раствор, инг)	20,86±1,82 n=15	18,81±1,67 n=15	17,10±1,60* n=11	17,88±2,68* n=10	18,40±2,93* n=9	16,13±1,91* n=9	15,97±2,27* n=8	16,65±2,48* n=8	17,57±2,61* n=3
ИЛ-1ра, инг	20,82±2,02 n=15	19,19±1,97 n=15	17,44±1,62* n=12	18,38±2,89* n=12	18,47±2,93* n=11	16,79±1,96* n=10	17,42±1,25* n=8	18,27±1,28* n=8	16,23±0,64* n=3
ИЛ-1ра +СОД, инг	20,81±1,60 n=15	19,05±1,47 n=15	16,91±1,62* n=14	17,59±1,50* n=14	17,93±1,48* n=14	16,61±1,56* n=13	16,86±1,47* n=12	16,91±1,98* n=12	16,53±1,50* n=4

Примечание: * - статистически значимые отличия от интактной группы (р≤0,05) по критерию Стьюдента

Таблица 2. Результаты исследования функции внешнего дыхания мышей на 1 сутки после трехкратного внутрибрюшинного введения блеомицина (данные представлены в виде Ме (Q1; Q3))

Table 2. Results of the study of the external respiratory function of mice on the 1st day after triple intraperitoneal administration of bleomycin (data are presented as Me (Q1; Q3))

Группа	ЧД, мин-1	Амплитуда, мм вод.ст.	Скорость выдоха, мм вод.ст./с	Скорость вдоха, мм вод.ст./с
Контроль (интактный), n=13	330,1 (319,4; 362,3)	0,153 (0,146; 0,155)	7,971 (7,528; 8,987)	11,499 (9,570; 12,290)
Контроль (физ. раствор, п/к ), n=6	349,3 (329,8; 360,2)	0,103 (0,081; 0,125)*	5,916 (5,249; 6,208)*	8,420 (6,020; 10,007)
ИЛ-1ра, п/к, n=10	394,1 (368,8; 400,8)*α	0,136 (0,121; 0,155)	7,613 (6,702; 8,177)α	11,275 (7,429; 14,221)
ИЛ-1ра+СОД, п/к, n=11	398,1 (378,6; 414,2)*α	0,132 (0,124; 0,149)α	6,909 (6,717; 7,985)*α	10,720 (9,260; 12,195)
Контроль (физ. раствор, инг), n=6	366,4 (339,9; 371,5)	0,121 (0,108; 0,122)*	6,303 (6,131; 6,660)*	9,427 (8,853; 9,848)
ИЛ-1ра, инг, n=6	378,9 (373,4; 382,0)*	0,161 (0,142; 0,174)	9,027 (8,833; 9,645)	14,464 (12,780; 15,090)*α
ИЛ-1ра+СОД, инг, n=10	354,0 (326,8; 375,5)	0,130 (0,092; 0,148)*	6,796 (5,715; 8,478)	9,644 (5,459; 11,192)

Примечание: * - статистически значимые отличия от интактной группы (р≤0,05) по критерию Манна-Уитни; ^α – статистически значимые различия с группой, получавшей физ. раствор (р≤0,05), по критерию Манна-Уитни.

Рисунки

Рис. 1. Количество погибших животных при подкожном (п/к) и ингаляционном (инг) курсовом введении ИЛ-1ра («ра») и ИЛ-1ра+СОД («ра+сод») на фоне трехкратного внутрибрюшинного введения блеомицина. Стрелками обозначены дни введения блеомицина

Fig. 1. The number of animals that died after subcutaneous and inhalation course administration of IL-1ra and IL-1ra+SOD with triple intraperitoneal administration of bleomycin. Arrows indicate the days of bleomycin administration

Рис. 2. Амплитуда изменения давления воздушного потока (мм вод. ст.) при подкожном (п/к) и ингаляционном (инг) курсовом введении ИЛ-1ра («ра») и ИЛ-1ра+СОД («ра+сод») на фоне трехкратного внутрибрюшинного введения блеомицина

Fig. 2. The amplitude of the change in air flow pressure (mm H₂O) during subcutaneous and inhalation course administration of IL-1ra and IL-1ra+SOD with triple intraperitoneal administration of bleomycin

Рис. 3. Скорость увеличения давления воздушного потока при выдохе (мм вод. ст./с.) при подкожном (п/к) и ингаляционном (инг) курсовом введении ИЛ-1ра («ра») и ИЛ-1ра+СОД («ра+сод») на фоне трехкратного внутрибрюшинного введения блеомицина

Fig. 3. The rate of increase in air flow pressure during exhalation (mm H₂O/s) with subcutaneous and inhalation course administration of IL-1ra and IL-1ra+SOD with triple intraperitoneal administration of bleomycin

Рис. 4. Легкие мышей из группы интактного контроля; ув х 20, окраска гематоксилин эозином: А - № 203, отсутствие деструктивных изменений;

Б - № 202, выраженная спонтанная патология

Fig. 4. Lungs of mice from the intact control group; magnification x20, hematoxylin eosin staining: A - № 203, no destructive changes; B - № 202, pronounced spontaneous pathology

Рис. 5. Легкие мышей из группы позитивного контроля, получавшей физиологический раствор; окраска гематоксилин эозином: А - № 212, плазматизация и геморрагическое пропитывание межальвеолярных перегородок, ув х 40; Б - № 214, просветы альвеол заполнены эритроцитами, ув х 63

Fig. 5. Lungs of mice from the positive control group that received saline solution; hematoxylin and eosin staining: A - № 212, plasmatization and hemorrhagic impregnation of the interalveolar septa, magnification x 40; B - № 214, the alveolar lumens are filled with erythrocytes, magnification x 63

Рис. 6. Легкие мышей из опытной группы, получавшей ИЛ-1ра подкожно; ув х 20, окраска гематоксилин эозином: А - № 205, кровоизлияние в паренхиму легких;

Б - № 206, перибронхиальные инфильтраты

Fig. 6. Lungs of mice from the experimental group that received IL-1ra subcutaneously; magnification x 20, hematoxylin and eosin staining: A - № 205, hemorrhage into the lung parenchyma; B - № 206, peribronchial infiltrates

Рис. 7. Легкое мыши из опытной группы, получавшей ИЛ-1ра+СОД подкожно; ув х 63, окраска гематоксилин эозином: № 211, диапедез эритроцитов в просвет альвеол, плазматическое пропитывание межальвеолярных перегородок с инфильтрацией

полиморфноядерными лейкоцитами

Fig. 7. Lung of a mouse from the experimental group that received IL-1ra + SOD subcutaneously; magnification x 63, hematoxylin and eosin staining: № 211, erythrocyte diapedesis into the alveolar lumen, plasma impregnation of the interalveolar septa with infiltration of polymorphonuclear leukocytes

About the authors

Alexander M. Ischenko

State Research Institute of Highly Pure Biopreparations

Email: amischenko1946@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-6661-6145
SPIN-code: 5860-4216

Candidate of Biological Sciences

Russian Federation, 197110, Saint Petersburg, ul. Pudozhskaya, d. 7

Kseniya A. Nekrasova

State Research Institute of Highly Pure Biopreparations

Author for correspondence.
Email: k.a.nekrasova@hpb.spb.ru
ORCID iD: 0000-0002-0242-9615
SPIN-code: 9435-6100

Candidate of Biological Sciences, Head of R&D Department

Russian Federation, 197110, Saint Petersburg, ul. Pudozhskaya, d. 7

Denis S. Laptev

Research Institute of Hygiene, Occupational Pathology and Human Ecology Federal Unitary Enterprise under Federal Medical Biological Agency

Email: aptev@gpech.ru
SPIN-code: 2873-5071

Candidate of Biological Sciences

Russian Federation, 188663, Leningrad obl., Vsevolozhsky r-n, Kuzmolovskoye g.p., gp Kuzmolovsky, ul. Zavodskaya, zd. 6/2, korp. 93

Dmitry V. Bobkov

Research Institute of Hygiene, Occupational Pathology and Human Ecology Federal Unitary Enterprise under Federal Medical Biological Agency

Email: bobkov@gpech.ru
SPIN-code: 2673-8240
Russian Federation, 188663, Leningrad obl., Vsevolozhsky r-n, Kuzmolovskoye g.p., gp Kuzmolovsky, ul. Zavodskaya, zd. 6/2, korp. 93

Alexandr A. Kolobov

Research Institute of Hygiene, Occupational Pathology and Human Ecology Federal Unitary Enterprise under Federal Medical Biological Agency

Email: aak1959@internet.ru
ORCID iD: 0000-0002-9222-6773
SPIN-code: 7019-2420

доктор биологических наук

Russian Federation, 188663, Leningrad obl., Vsevolozhsky r-n, Kuzmolovskoye g.p., gp Kuzmolovsky, ul. Zavodskaya, zd. 6/2, korp. 93

Andrey S. Simbirtsev

State Research Institute of Highly Pure Biopreparations

Email: a.s.simbirtsev@hpb.spb.ru
ORCID iD: 0000-0002-8228-4240
SPIN-code: 2064-7584

Doctor of Medical Sciences, scientific director of the institute

Russian Federation, 197110, Saint Petersburg, ul. Pudozhskaya, d. 7

References

Supplementary files