Evaluation of the immunomodulatory and antiviral effects of small interfering RNAs Nup98.1 and Nup205.1 in an in vivo influenza model

封面


如何引用文章

全文:

开放存取 开放存取
受限制的访问 ##reader.subscriptionAccessGranted##
受限制的访问 订阅或者付费存取

详细

BACKGROUND: Influenza remains a significant global public health challenge. Currently, the challenges of viral resistance to existing antiviral drugs and the immunosuppressive effects induced by the influenza virus remain urgent issues. A promising strategy involves developing antiviral agents that inhibit cellular gene activity via RNA interference.

AIM: To evaluate the immunomodulatory and anti-influenza effects of small interfering RNAs targeting cellular genes in a murine model of influenza virus infection.

METHODS: The study utilized the mouse-adapted influenza virus strain A/California/7/09 (H1N1) and BALB/c mice. Small interfering RNA administration and viral infection were performed intranasally. Changes in cytokine profiles and viral replication were assessed using molecular-genetic and virological methods.

RESULTS: Based on the evaluation of cytokine expression dynamics, no statistically significant differences were observed in systemic cytokine levels (blood), except for IL-6, TNF-α, and IL-10, between the experimental and control groups. In the lungs, intranasal administration of all small interfering RNA complexes resulted in decreased IL-1β and TNF-α expression, while IL-1β and IL-6 expression increased in upper respiratory tract lavage samples. The use of small interfering RNAs Nup98.1 and Nup98.1/Nup205.1 led to a significant increase in IL-10 expression in the lungs by day 3, whereas Nup205.1 resulted in a significant increase in IL-10 levels in the upper respiratory tract by the same time point. TGF-β1 expression decreased in the lungs but increased in the blood by day 3 across all small interfering RNA complexes. Significant differences in the expression of pro- and anti-inflammatory cytokines were observed at the local level. The most pronounced immunomodulatory effects were observed in the upper respiratory tract and lungs, the primary sites of small interfering RNA administration. Parallel to these immune profile alterations, viral replication was reduced by 1–2.5 orders of magnitude compared to control groups.

CONCLUSIONS: This study provides evidence that small interfering RNAs targeting one or more cellular genes in an in vivo model can significantly reduce viral replication while modulating cytokine profiles.

全文:

Обоснование

Респираторные вирусные инфекции представляют собой одну из глобальных проблем, несущих тяжёлые социальные и экономические последствия. В 2021 году во всём мире гриппозная инфекция унесла почти 650 000 жизней1. Осложнения гриппозной инфекции зачастую затрагивают не только респираторную, но и центральную нервную, мочеполовую, сердечнососудистую и иммунную системы, а также вызывают развитие бактериальных и грибковых осложнений [1]. Ввиду развития лекарственной резистентности вируса гриппа на сегодняшний день имеет место недостаток эффективных средств лечения данного заболевания. Высокая частота сопутствующих осложнений и смертности связана также и с тем, что вирусы гриппа имеют в своём составе белки, которые придают им иммуносупрессорные свойства. Одним из наиболее изученных подобных белков является NS-1, основная функция которого заключается в нарушении функционирования интерферон-опосредованных механизмов защиты организма, что приводит к снижению экспрессии ряда генов, кодирующих компоненты гуморального иммунитета [2].

В формировании противогриппозного иммунитета ключевую роль играют цитокины IL-1β, IL-6, TNF-α, IL-10 и TGF-1β. IL-1β принимает участие в усилении экспрессии генов MCP-1 и MCP-3 и функциональном созревании тканевых макрофагов и дендритных клеток. Это приводит к усилению воспалительной реакции и активации эффективной системы презентации антигена [3]. Было показано, что TNF-α обладает противовирусной активностью в эпителиальных клетках лёгких [4]. Кроме того, TNF-α активирует макрофаги и стимулирует созревание дендритных клеток. Увеличение экспрессии TNF-α также коррелирует с продукцией IL-10, который является основным противовоспалительным цитокином, чья функция состоит в регуляции и предотвращении избыточной воспалительной реакции [5]. IL-6 принимает участие в стимуляции синтеза белков острой фазы и выработке нейтрофилов в костном мозге [6]. TGF-1β выступает ключевым регулятором сигнального пути, способствующего образованию Treg-клеток [7].

Одной из перспективных технологий для преодоления данной проблемы является создание специфических антивирусных препаратов, основанных на механизме РНК-интерференции — процесса нарушения экспрессии целевого гена с помощью молекулы малой интерферирующей РНК (миРНК, siRNA) [8].

Цель исследования — оценка иммуномодулирующего эффекта миРНК, заключающегося в изменении экспрессии цитокинов IL-1β, IL-6, TNF-α, IL-10 и TGF-1β в лёгких, в верхних дыхательных путях (ВДП) и в крови в результате подавления активности клеточных генов Nup98 и Nup205 на модели in vivo, а также оценка противогриппозного эффекта самих миРНК.

Материалы и методы

миРНК

Подбор и анализ миРНК к необходимым последовательностям мРНК осуществляли с использованием программного обеспечения VectorNTI.11 и siDirect 2.0. Последовательности мРНК получены из базы данных GenBank (NCBI). Выполняли выравнивание нескольких вариантов мРНК каждого гена с использованием программы VectorNTI.11 и выбирали наиболее консервативные участки мРНК. К этим участкам подбиралось по два варианта миРНК с помощью программы siDirect 2.0.

Синтез олигорибонуклеотидов был выполнен НПК «Синтол» (Москва, Россия). Каждый олигорибонуклеотид имеет 2 дезоксинуклеотида на 3’-конце. Это необходимо для минимизации отрицательного влияния ферментовэкзонуклеаз. Для достижения количества вещества, равного 100 пкмоль/мкл, в соответствии с инструкциями производителя комплементарные одноцепочечные олигорибонуклеотиды смешивали с деионизованной водой (Thermo Fisher Scientific, США) и хранили при температуре −80 °С. Для получения необходимого количества вещества (концентрации) миРНК смешивали между собой комплементарные одноцепочечные олигорибонуклеотиды, в течение 1 мин нагревали до 60 °С, затем остужали до комнатной температуры при окружающей температуре 25 °С. Полученные дуплексы хранили при температуре −80 °С. Подробные механизмы приготовления комплексов миРНК, а также их последовательности отражены в раннем исследовании [9].

Культуры клеток

В работе использовались клетки почек кокер-спаниеля MDCK (Институт Пастера, Франция) и клетки мышиных фибробластов L929 [Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова (НИИ ВС им. И.И. Мечникова), Россия]. Клетки MDCK выращивали в среде Minimum Essential Medium (MEM; ПанЭко, Россия), содержащей 5% эмбриональной сыворотки коров (ЭСК) Gibco (Fisher Scientific, Новая Зеландия), 40 мкг/мл гентамицина (ПанЭко, Россия) и 300 мкг/мл L-глутамина (ПанЭко, Россия), при 37 °С в CO2-инкубаторе.

Вирус

В работе использован вирус гриппа A/California/7/09 (H1N1), полученный из коллекции вирусов НИИ ВС им. И.И. Мечникова. Культивирование вируса проводилось на культуре клеток MDCK.

Лабораторные животные

В работе использовали мышей линии BALB/с (Столбовая, Россия) массой 16–18 г. Все экспериментальные процедуры проводились соответствии с Директивой Совета Европейских Сообществ от 24.11.1986 (86/609/EEC). Протокол исследования в рамках диссертационной работы2 был одобрен на заседании локальным этическим комитетом ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» (протокол № 03-24 от 08.02.2024) [9].

Дизайн эксперимента

В работе использовалось 5 групп мышей по 3 головы, 3 группы из которых обрабатывались специфическими миРНК, количество вводимого вещества при этом составляло 1,5 нмоль/мкл. Введение миРНК осуществлялось без использования носителя [10]. Остальные группы принадлежали к группе неспецифического и вирусного контроля.

Мышей подвергали эвтаназии парами хлороформа с использованием газовой камеры на 24, 48 и 72-й час с момента инфицирования. Перед умерщвлением у мышей выполнялся смыв из ВДП, а также проводился забор крови посредством вскрытия сонной артерии под наркозом. После умерщвления у погибших животных изымались лёгкие для последующего определения титра вируса по цитопатическому действию (ЦПД) и экспрессии цитокинового профиля посредством полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени ОТ-ПЦР-РВ.

Изъятые лёгкие гомогенизировали в 1,5 мл среды MEM, а затем осветляли центрифугированием при 10 000 об./мин в течение 5 мин на микроцентрифуге (Eppendorf, Германия). Надосадочную жидкость использовали для выделения тотальной РНК и титрования вируса в культуре клеток (образцы предварительно фильтровали, используя фильтры с диаметром пор 0,1 мкм). Все полученные образцы хранили при –70 °С с целью последующего использования для титрования по ЦПД и постановки ОТ-ПЦР-РВ.

Методы определения экспрессии миРНК цитокинов

Тотальную РНК выделяли из лёгочного гомогената, смыва из ВДП и крови мышей набором ExtractRNA (Evrogen, Россия). Для постановки реакции обратной транскрипции (ОТ) применяли набор реагентов ОТ-1 (Синтол, Россия) [11]. Для ПЦР-РВ использовали набор реагентов для проведения ПЦР-РВ в присутствии красителя EVA Green и референсного красителя ROX (Синтол, Россия). Рабочая концентрация праймеров составила 10 пмоль на реакционную смесь. Реакция ПЦР-РВ проводилась в амплификаторе ДТ-96 (ДНК-технология, Россия). Температурно-временной режим составил 95 °С в течение 5 мин (1 цикл), 62 °С — 40 с, 95 °С — 15 с (40 циклов). Праймеры для определения экспрессии цитокинов (Синтол, Россия) представлены в исследованиях [11–15]. Специфичность полученного сигнала оценивалась посредством выстраивания кривой при амплификации. Оценка изменения экспрессии целевого гена проводилась с использованием критерия 2−ΔΔCT [14]. Оценку влияния миРНК, направленных на мышиные гены (Nup98 и Nup205), на экспрессию генов цитокинов, проводили относительно неспецифичной миРНК L2. Выполнялся расчёт разницы трёх повторов значений пороговых циклов ПЦР (∆Ct) между исследуемыми генами неспецифического контроля siL2 и геном домашнего хозяйства GAPDH:

∆Ct = Ct (интересующий ген) − Ct (GAPDH).

Аналогичный расчёт ∆Ct проводился для клеток, обработанных специфическими миРНК (Nup98.1, Nup205.1, Nup98.1/Nup205.1). Полученные данные усреднялись.

После определения ∆Ct для всех исследуемых групп полученные в трёх повторах данные ∆Ct усреднялись, а затем рассчитывалось значение ∆∆Ct относительно среднего значения ∆Ct для клеток, обработанных миРНК:

∆∆Ct = ∆Ct (обработанный специфическими миРНК образец) − ∆Ct (неспецифический контроль siL2).

Для определения критерия 2−ΔΔCT необходимо 2 возвести в степень полученного значения ∆∆Ct для каждого исследуемого гена. Далее данные 2–ΔΔCT будут представлены в относительных единицах (ОЕ) [15].

Титрование вируса по конечной точке цитопатического действия

Вирусный титр определялся микроскопически по крайней точке проявления цитопатического эффекта в культуре клеток MDCK. Клетки MDCK сеяли в 96-луночные планшеты при посевной концентрации 1×104/см2 на лунку. Через двое суток питательная среда удалялась из лунок, вносили 10-кратные последовательные разведения вирусного материала в поддерживающей среде и инкубировали на протяжении четырёх суток в СО2-инкубаторе при 37 °С. На четвертые сутки проводили визуальный учёт результатов титрования под микроскопом на наличие специфического цитопатического эффекта для вируса гриппа (изменение, деформация, открепление мёртвых клеток со дна лунки). Вирусный титр рассчитывался по M.A. Ramakrishnan [16] и выражался как логарифм тканевых цитопатогенных доз (lg ТЦД50/мл).

Статистический анализ

Статистическую значимость полученных результатов определяли с помощью критерия Манна–Уитни. Разница считалась достоверной при p ≤0,01 и p ≤0,05.

Результаты

Влияние миРНК на изменение экспрессии цитокинового профиля in vivo при гриппе

В лёгких мышей при интраназальном введении всех комплексов миРНК отмечалось снижение уровня экспрессии IL-1β на вторые сутки с момента трансфекции в 0,6, 1,7 и в 4,5 ОЕ по отношению к неспецифическому контролю siL2. В смывах ВДП на первые сутки отмечалось повышение экспрессии IL-1β также при введении всех комплексов миРНК. В данном случае, при интраназальном введении Nup98.1, рост экспрессии IL-1β на первые сутки составил 1036 ОЕ, для миРНК Nup205.1 — 112,6 ОЕ, а для Nup98.1/Nup205.1 — 557,5 ОЕ. В крови не отмечалось достоверного изменения экспрессии IL-1β.

При оценке экспрессии IL-6 были получены следующие результаты. В лёгких мышей не отмечалось достоверного роста экспрессии IL-6 после интраназального введения комплексов миРНК и инфицирования, однако наблюдалось снижение экспрессии указанного цитокина в 25 ОЕ в ВДП спустя 72 ч с момента интраназального введения миРНК и инфицирования при использовании миРНК Nup205.1. Было установлено, что в тех группах, где мышей обрабатывали комплексами Nup98.1 и Nup205.1, наблюдалось снижение экспрессии указанного цитокина в крови к третьим суткам в 45,2 и в 63,1 ОЕ соответственно.

Уровень экспрессии TNF-α в лёгких снижался на вторые и третьи сутки. Экспрессия TNF-α в ВДП повышалась на вторые сутки при использовании всех комплексов миРНК в 588, 159 и 200 ОЕ. При оценке изменения экспрессии TNF-α в крови достоверных различий не обнаруживалось.

При использовании миРНК Nup98.1 и Nup98.1/Nup205.1 наблюдалось достоверное увеличение экспрессии IL-10 в лёгких к третьим суткам в 52,9 и 183,1 ОЕ с момента их интраназального введения на первые сутки. Повышение экспрессии IL-10 в ВДП отмечалось на третьи сутки при использовании миРНК Nup205.1 и составило 570 ОЕ. Достоверного изменения экспрессии IL-10 в крови мышей не наблюдалось.

Далее было установлено, что экспрессия TGF-β1 снижалась на третьи сутки с момента трансфекции на 29,9, 53,2 и 63,1 ОЕ при введении всех комплексов миРНК по отношению к первым суткам. При этом противоположный результат отмечался при оценке динамики экспрессии TGF-β1 в крови мышей. В данном случае наблюдался рост экспрессии среди групп мышей, обработанных миРНК Nup98.1 и Nup205.1, и составил 2 и 1,5 ОЕ. В случае с эквимолярной смесью Nup98.1/Nup205.1 отмечалось снижение экспрессии TGF-β1 в 0,9 ОЕ. Полученные данные представлены в табл. 1.

 

Таблица 1. Влияние комплексов миРНК, направленных к генам Nup98 и Nup2٠5, на изменение концентрации цитокинов

Table 1. Effect of siRNA complexes directed to the Nup98 and Nup2٠5 genes on changes in cytokine concentrations

Комплекс миРНК

Уровень экспрессии, относительные единицы

Лёгкие

Верхние дыхательные пути

Кровь

1-е сутки

2-е сутки

3-и сутки

1-е сутки

2-е сутки

3-и сутки

1-е сутки

2-е сутки

3-и сутки

IL-1β

Nup98.1

1

−0,6*

1890

1

+1036,6*

0,03

1

743,2

723,8

Nup205.1

1

−1,7*

677

1

+112,6*

12,7

1

6016

5169

Nup98.1/ Nup205.1

1

−4,5*

2245

1

+557,5*

0,2

1

4712

698

siL2

1

112,4

603

1

0

1,2

1

71 446

2134

IAV

1

100

1748

1

0

0,6

1

14 985

350,1

IL-6

Nup98.1

1

1

28,7

1

1

34,6

1

1

−45,2*

Nup205.1

1

1

34,05

1

1

−25,08*

1

1

−63,1*

Nup98.1/ Nup205.1

1

1

48,3

1

1

29,2

1

1

101,8

siL2

1

1

78,5

1

1

38,2

1

1

136,4

IAV

1

1

80,5

1

1

43,6

1

1

151,4

TNF-α

Nup98.1

1

−333*

−0,05*

1

+588*

84,14

1

103,5

112,59

Nup205.1

1

620

−0,4*

1

+159,5*

20,96

1

601

183,52

Nup98.1/ Nup205.1

1

441

−0,12*

1

+200*

0

1

572,5

741,2

siL2

1

1286

33,8

1

70,5

56,46

1

793

4695,7

IAV

1

833

34

1

26

22,24

1

1275

6890,8

IL-10

Nup98.1

1

1

+ 52,9*

1

1

12,1

1

1

90

Nup205.1

1

1

92,6

1

1

+570*

1

1

4472

Nup98.1/ Nup205.1

1

1

+183*

1

1

7,3

1

1

4543

siL2

1

1

5,4

1

1

254

1

1

42 467

IAV

1

1

1,2

1

1

134

1

1

58 280

TGF-β1

Nup98.1

1

1

−29,9*

1

1

76,61

1

1

+2*

Nup205.1

1

1

−53,2*

1

1

97,34

1

1

+1,5*

Nup98.1/ Nup205.1

1

1

−63,1*

1

1

132,3

1

1

−0,9*

siL2

1

1

260,1

1

1

198,6

1

1

80,67

IAV

1

1

146,1

1

1

126,3

1

1

1,75

Примечание. В таблице полужирным выделены достоверные значения при (* р ≤0,05).

Note. In the table, significant values are highlighted in bold at (* p ≤0.05).

 

Противовирусный эффект комплексов миРНК

Использование всех миРНК приводило к снижению вирусной репродукции. Применение миРНК Nup98.1 снижало вирусную репродукцию на третьи сутки на 2,3 lg ТЦД50/мл по сравнению с неспецифической группой контроля siL2. На 2,1 lg ТЦД50/мл достоверно снижался вирусный титр при использовании миРНК Nup205.1. При оценке противовирусной активности эквимолярной смеси Nup98.1/Nup205.1 было установлено, что у мышей, обработанных данным комплексом, вирусная активность была достоверно снижена на 1,4 lg ТЦД50/мл. Полученные данные представлены на рис. 1.

 

Рис. 1. Влияние подавления генов Nup98 и Nup2٠5 посредством миРНК на репродукцию вируса гриппа A/California/٧/٠9 (H1N1) на 3-и сутки с момента трансфекции при LD5٠. На оси абсцисс — названия миРНК; на оси ординат — показатель вирусного титра. * р <٠,٠5 относительно неспецифической siL2.

Fig. 1. Effect of Nup98 and Nup2٠5 gene silencing by siRNA on the replication of influenza A/California/٧/٠9 (H1N1) virus on day 3 post transfection at LD5٠. The abscissa shows the siRNA names; the ordinate shows the viral titer. * p <٠.٠5 relative to non-specific siL2.

 

Обсуждение

По результатам проведённой оценки динамики экспрессии цитокинов было установлено, что на локальных уровнях наблюдались достоверные различия в экспрессии про- и противовоспалительных цитокинов. При использовании всех миРНК на вторые сутки с момента трансфекции и инокуляции отмечался наиболее выраженный рост экспрессии провоспалительных цитокинов IL-1β (1036, 112,6 и 557,5 ОЕ соответственно) и TNF-α (588, 159 и 200 ОЕ соответственно). К третьим суткам экспрессия указанных цитокинов снижалась и не наблюдалось достоверной разницы по сравнению с группой неспецифического контроля. Также при использовании миРНК Nup98.1 и Nup98.1/Nup205.1 в лёгких к третьим суткам отмечалось достоверное нарастание уровня экспрессии противовоспалительного IL-10 на 52,9 и 183 ОЕ на фоне снижения экспрессии TGF-β1 и TNF-α.

При трансфекции миРНК Nup205.1 наблюдались следующие результаты. На третьи сутки в ВДП отмечался рост уровня экспрессии IL-10 на 570 ОЕ, а в крови — повышение уровня экспрессии TGF-β1 на 1,5 ОЕ. Достоверное изменение экспрессии IL-10 и TGF-β1 обнаруживалось на фоне снижения IL-6 в ВДП на 25 ОЕ и на системном уровне на 63,1 ОЕ.

Использование всех миРНК приводит к противовирусному эффекту на третьи сутки с момента инокуляции вируса и интраназального введения миРНК. При использовании миРНК Nup98.1, Nup205.1 и Nup98.1/Nup205.1 показатель вирусного титра составил 5,5, 5,7 и 6,8 lg ТЦД50/мл, в то время как в группах неспецифического и вирусного контроля титр вируса составил 7,8 и 7,9 lg ТЦД50/мл.

При оценке экспрессии цитокинов после применения комплексов миРНК было установлено выраженное иммуномодулирующее действие комплексов миРНК. Наличие иммуномодулирующего эффекта может быть обусловлено тем, что комплексы миРНК взаимодействовали с TLR и это способствовало изначальному повышению продукции провоспалительных цитокинов, а далее приводило к увеличению продукции противовоспалительных цитокинов. Предположительно, наблюдаемая динамика экспрессии рассматриваемых цитокинов обусловлена как взаимодействием инокулированных миРНК с TLR 3, 7 и 8-го типов [17, 18], так и нарушением процесса вирусной репродукции, о чём говорят полученные результаты оценки противогриппозной активности миРНК. Схожий результат, заключающийся в ингибировании вирусной репродукции посредством инокуляции циркулирующей РНК in vitro и in vivo, на фоне чего наблюдается активация IFN-β, отражён в исследовании Jie Min и соавт. [19].

Наличие дискордантного изменения экспрессии цитокинов на локальном и системном уровнях может быть обусловлено выбранным путём введения миРНК. В связи с тем, что соединения вводились локально, более выраженная экспрессия наблюдалась в ВДП и лёгких.

Вопрос создания лекарственных средств для экстренной профилактики и терапии гриппозной инфекции в настоящее время имеет особую актуальность. Предельно важно, чтобы разрабатываемые лекарственные препараты были безопасны для пациента и имели узкий спектр противопоказаний. Дополнительным их свойством должна быть способность на фоне противовирусного эффекта оказывать также и иммуностимулирующий эффект [20]. В настоящем исследовании получены данные о том, что противогриппозный эффект комплексов миРНК на модели in vivo приводит к выраженному иммуномодулирующему эффекту в ВДП и лёгких, в местах введения комплексов миРНК, несмотря на способность вируса гриппа оказывать иммуносупрессивное действие.

Резюме основного результата исследования

Полученные результаты свидетельствуют о том, что исследованные в работе миРНК обладают не только противовирусной активностью, но также и иммуномодулирующей, что способствует более эффективному иммунному ответу организма. Установлено, что на фоне снижения вирусной репродукции в экспериментальных группах наблюдается изменение экспрессии исследуемых групп цитокинов.

Обсуждение основного результата исследования

Использование миРНК на модели in vivo приводит к повышению экспрессии генов исследуемых цитокинов на локальных уровнях в местах введения комплексов миРНК на фоне снижения вирусной репродукции. Это свидетельствует о том, что препараты миРНК способны обладать не только противовирусным эффектом, но также и иммуностимулирующим.

Заключение

Данные результаты позволят разработать принципы быстрого проектирования и создания специфических противовирусных средств, предназначенных для защиты от старых и новых патогенных вирусов, обеспечения противоэпидемической безопасности различных групп населения и эффективного ответа на возникновение пандемий и случаев биотерроризма.

Дополнительная информация

Источник финансирования. Исследование и публикация статьи осуществлены за счёт финансирования в рамках государственного задания.

Раскрытие интересов. Авторы заявляют об отсутствии отношений, деятельности и интересов (личных, профессиональных или финансовых), связанных с третьими лицами (коммерческими, некоммерческими, частными), интересы которых могут быть затронуты содержанием статьи, а также иных отношений, деятельности и интересов за последние три года, о которых необходимо сообщить.

Вклад авторов. Е.А. Пашков — выполнение экспериментов, обзор литературы, сбор и анализ литературных источников, написание текста и редактирование статьи; Е.Б. Файзулоев, Д.В. Мильчаков, Р.Е. Лушников, Л.С. Рожкова — выполнение экспериментов, написание текста; Е.А. Богданова, О.А. Свитич, В.В. Зверев — обзор литературы, сбор и анализ литературных источников, написание текста и редактирование статьи. Все авторы одобрили версию для публикации, а также согласились нести ответственность за все аспекты работы и гарантировали, что вопросы, связанные с точностью или добросовестностью любой части работы, будут должным образом рассмотрены и решены.

Additional information

Funding source. The research and publication of the article were carried out with funding from a government assignment.

Disclosure of interest. The authors have no relationships, activities or interests (personal, professional or financial) with for-profit or not-for-profit third parties whose interests may be affected by the content of the manuscript, as well as other relationships, activities or interests for the last three years that needed to disclose.

Authors’ contribution. E.A. Pashkov — conducting experiments, literature review, collection and analysis of literary sources, writing the text and editing the article; E.B. Faizuloev, D.V. Milchakov, R.E. Lushnikov, L.S. Rozhkova — conducting experiments, writing the text; E.A. Bogdanova, O.A. Svitich, V.V. Zverev — literature review, collection and analysis of literary sources, writing the text and editing the article. Thereby, authors provided approval of the version to be published and agree to be accountable for all aspects of the work in ensuring that questions related to the accuracy or integrity of any part of the work are appropriately investigated and resolved.

 

1 Грипп (сезонный): информационный бюллетень [интернет]. Режим доступа: https://www.who.int/ru/news-room/fact-sheets/detail/influenza-(seasonal)

2 Пашков Е.А. Иммунные механизмы интерференции РНК в противогриппозной защите : дис. ... канд. мед. наук. Москва, 2024. 105 с.

×

作者简介

Evgeny Pashkov

I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera; I.M. Sechenov First Moscow State Medical University

编辑信件的主要联系方式.
Email: pashckov.j@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-5682-4581
SPIN 代码: 4933-1128

MD, Cand. Sci. (Medicine)

俄罗斯联邦, Moscow; Moscow

Evgeny Faizuloev

I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera

Email: faizuloev@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-7385-5083
SPIN 代码: 1908-7720

Cand. Sci. (Biology)

俄罗斯联邦, Moscow

Danil Milchakov

I.M. Sechenov First Moscow State Medical University

Email: qugard1@gmail.com
ORCID iD: 0009-0001-6247-7088
俄罗斯联邦, Moscow

Ruslan Lushnikov

I.M. Sechenov First Moscow State Medical University

Email: ruslan_lushnikov@mail.ru
ORCID iD: 0009-0008-4788-0005
SPIN 代码: 1703-5706
俄罗斯联邦, Moscow

Ekaterina Bogdanova

I.M. Sechenov First Moscow State Medical University

Email: bogdekaterin@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-5620-1843
SPIN 代码: 7250-5808

MD, Cand. Sci. (Medicine)

俄罗斯联邦, Moscow

Lanita Rozhkova

I.M. Sechenov First Moscow State Medical University

Email: lanitarozhkova@yandex.ru
ORCID iD: 0009-0002-6150-9938
俄罗斯联邦, Moscow

Oxana Svitich

I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera; I.M. Sechenov First Moscow State Medical University

Email: svitichoa@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0003-1757-8389
SPIN 代码: 8802-5569

MD, Dr. Sci. (Medicine), Professor, Corresponding Member of the Russian Academy of Sciences

俄罗斯联邦, Moscow; Moscow

Vitaly Zverev

I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera; I.M. Sechenov First Moscow State Medical University

Email: vitalyzverev@outlook.com
ORCID iD: 0000-0002-0017-1892
SPIN 代码: 2122-1808

Dr. Sci. (Biology), Professor, academician of the Russian Academy of Sciences

俄罗斯联邦, Moscow; Moscow

参考

  1. Valenzuela-Sánchez F, Valenzuela-Méndez B, Rodríguez-Gutiérrez JF, Estella Á. Latest developments in early diagnosis and specific treatment of severe influenza infection. J Intensive Med. 2023;4(2):160–174. doi: 10.1016/j.jointm.2023.09.006 EDN: XDYOCO
  2. Zhang Q, Zhang X, Lei X, et al. Influenza A virus NS1 protein hijacks YAP/TAZ to suppress TLR3-mediated innate immune response. PLoS Pathog. 2022;18(5):e1010505. doi: 10.1371/journal.ppat.1010505
  3. Park HS, Liu G, Thulasi Raman SN, et al. NS1 protein of 2009 pandemic influenza A virus inhibits porcine NLRP3 inflammasome-mediated interleukin-1 beta production by suppressing ASC ubiquitination. J Virol. 2018;92(8):e00022-18. doi: 10.1128/JVI.00022-18
  4. Hou Y, Wang Y, Chen J, Chen C. Dual roles of tumor necrosis factor superfamily 14 in antiviral immunity. Viral Immunol. 2022;35(9):579–585. doi: 10.1089/vim.2022.0070
  5. Wang X, Wong K, Ouyang W, Rutz S. Targeting IL-10 family cytokines for the treatment of human diseases. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2019;11(2):a028548. doi: 10.1101/cshperspect.a028548
  6. Cui H, Wang N, Li H, et al. The dynamic shifts of IL-10-producing Th17 and IL-17-producing Treg in health and disease: a crosstalk between ancient “Yin-Yang” theory and modern immunology. Cell Commun Signal. 2024;22(1):99. doi: 10.1186/s12964-024-01505-0 EDN: ILELJR
  7. Liu Q, Chen G, Moore J, et al. Exploiting canonical TGFβ signaling in cancer treatment. Mol Cancer Ther. 2022;21(1):16–24. doi: 10.1158/1535-7163.MCT-20-0891
  8. Wong KH, Lal SK. Alternative antiviral approaches to combat influenza A virus. Virus Genes. 2023;59(1):25–35. doi: 10.1007/s11262-022-01935-3 EDN: JAVTVZ
  9. Pashkov E, Korchevaya E, Faizuloev E, et al. Knockdown of FLT4, Nup98, and Nup205 cellular genes effectively suppresses the reproduction of influenza virus strain A/WSN/1933 (H1N1) in vitro. Infect Disord Drug Targets. 2022;22(5):e250322202629. doi: 10.2174/1871526522666220325121403 EDN: BIMTOK
  10. Kaushal A. Innate immune regulations and various siRNA modalities. Drug Deliv Transl Res. 2023;13(11):2704–2718. doi: 10.1007/s13346-023-01361-4 EDN: CCRRPJ
  11. Pashkov E, Momot V, Pak A, et al. Influence of siRNA complexes on the reproduction of influenza A virus (Orthomyxoviridae: Alphainfluenzavirus) in vivo. Vopr Virusol. 2023;68(2):95–104. doi: 10.36233/0507-4088-159 EDN: RHEUQD
  12. Bień K, Żmigrodzka M, Orłowski P, et al. Involvement of Fas/FasL pathway in the murine model of atopic dermatitis. Inflamm Res. 2017;66(8):679–690. doi: 10.1007/s00011-017-1049-z EDN: UPZREU
  13. Lin YC, Ku CC, Wuputra K, et al. Vulnerability of antioxidant drug therapies on targeting the Nrf2-Trp53-Jdp2 axis in controlling tumorigenesis. Cells. 2024;13(19):1648. doi: 10.3390/cells13191648 EDN: FSALVE
  14. Harshitha R, Arunraj DR. Real-time quantitative PCR: A tool for absolute and relative quantification. Biochem Mol Biol Educ. 2021;49(5):800–812. doi: 10.1002/bmb.21552 EDN: CKJOCM
  15. Hamilton TA, Ohmori Y, Tebo J. Regulation of chemokine expression by antiinflammatory cytokines. Immunol Res. 2002;25(3):229–245. doi: 10.1385/IR:25:3:229 EDN: HDVLYO
  16. Ramakrishnan MA. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World J Virol. 2016;5(2):85–86. doi: 10.5501/wjv.v5.i2.85
  17. Man HSJ, Moosa VA, Singh A, et al. Unlocking the potential of RNA-based therapeutics in the lung: current status and future directions. Front Genet. 2023;14:1281538. doi: 10.3389/fgene.2023.1281538 EDN: RWSUVR
  18. Hinay AA Jr, Kakee S, Kageyama S, et al. Pro-inflammatory cytokines and interferon-stimulated gene responses induced by seasonal influenza A virus with varying growth capabilities in human lung epithelial cell lines. Vaccines (Basel). 2022;10(9):1507. doi: 10.3390/vaccines10091507 EDN: WMROFZ
  19. Min J, Ma J, Wang Q, Yu D. Long non-coding RNA SNHG1 promotes bladder cancer progression by upregulating EZH2 and repressing KLF2 transcription. Clinics (Sao Paulo). 2022;77:100081. doi: 10.1016/j.clinsp.2022.100081
  20. Pak AV, Pashkov EA, Abramova ND, et al. Effect of antiviral siRNAs on the production of cytokines in vitro. Fine Chemical Technologies. 2022;17(5):384–393. doi: 10.32362/2410-6593-2022-17-5-384-393 EDN: MEFLST

补充文件

附件文件
动作
1. JATS XML
下载
2. Fig. 1. Effect of Nup98 and Nup2٠5 gene silencing by siRNA on the replication of influenza A/California/٧/٠9 (H1N1) virus on day 3 post transfection at LD5٠. The abscissa shows the siRNA names; the ordinate shows the viral titer. * p <٠.٠5 relative to non-specific siL2.

下载 (47KB)
索引源数据

版权所有 © Pashkov E.A., Faizuloev E.B., Milchakov D.V., Lushnikov R.E., Bogdanova E.A., Rozhkova L.S., Svitich O.A., Zverev V.V., 2024